简介

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

材料

试剂：

培养基(RPMI 1640、DMEM、SIM SF、Union-293等)、胎牛血清、双抗青链霉素、胰蛋白酶消化液、生理盐水

实验前准备：

完全培养基：90 %液体培养基+10 %胎牛血清+1 %双抗青链霉素

胰蛋白酶消化液

器械：

EP管、15 mL离心管、移液枪、离心机、细胞培养箱

实验步骤

►       贴壁细胞传代与培养

1.         倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代，并将培养基预热至37 ℃，胰酶消化液室温放置。

2.         用真空泵抽去培养皿中上清液，加入生理盐水洗涤两遍，除去悬浮的死细胞以及去除培养基，然后加入胰酶消化液1 mL，轻轻摇晃后放于细胞培养箱中1 min（可酌情增加时长，随时肉眼观察细胞的脱落情况），也可以放在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆即可，或晃动培养皿细胞呈现大片脱落时即可。

3.         加入2 mL培养基并迅速吹打培养皿底，将细胞吹散均匀后移入离心管中，用完全培养基补加至10 mL，130 g离心2 min。

4.         弃上清，加入1 mL完全培养基吹打均匀，取适量的细胞数加入到新的培养基中，摇晃均匀。

5.         放置培养箱中培养，可以每天观察，期间如果细胞培养基营养不够或者变黄时可更换成新鲜培养基。

▲       关键步骤：

控制好消化时间，有些贴壁细胞贴壁较紧，需要确保吹打均匀，否则细胞会聚团，不能呈现单个细胞贴壁，影响实验。重悬后的细胞可以取1/5放入新的培养基中，这可以根据实际情况操作。

►       悬浮细胞传代与培养

1.         倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代，并将完全培养基预热至37 ℃。

2.         向细胞中加入适量的新鲜培养基使细胞在合适浓度即可。